牛病毒性腹泻病毒通用PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒为牛病毒性腹泻病毒通用型检测试剂，靶向病毒高度保守基因片段，可覆盖各基因型牛病毒性腹泻病毒的核酸检测，采用高灵敏度RT-PCR技术，适配牛血液、血清、粪便、组织样本。可精准检出急性感染、持续性隐性感染样本，有效解决传统检测方法漏检问题。广泛应用于牛群引种检疫、种群净化、腹泻疫病病因确诊、规模化牛场疫病常态化防控及进出口畜禽检测。

基础原理：

靶向病毒 5’UTR 高度保守区设计通用探针引物，一步法 RT-qPCR 广谱检出所有基因型牛病毒性腹泻病毒。

通用 RT-PCR 扩增病毒非结构蛋白基因，电泳即可筛查牛血液、精液、粪便中病毒核酸。

多重通用荧光 RT-PCR，同步区分牛病毒性腹泻病毒与牛黏膜病相关病毒，无交叉反应。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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