牛副流感病毒型PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒采用一步法RT-PCR技术，适配牛副流感病毒RNA核酸检测，可对牛鼻腔拭子、呼吸道分泌物、肺组织样本中的病毒进行快速定性检测。试剂盒灵敏度高，可检出微量病毒核酸，能够实现疫病早期预警，有效区分牛副流感与其他牛呼吸道病毒性疫病。广泛应用于牛呼吸道综合征病因排查、临床病例确诊、规模化牛场疫病监测及区域畜禽疫病流行病学调研。

基础原理：

样本病毒 RNA 反转录为 cDNA，qRT-PCR 靶向病毒血凝素基因，探针实时荧光信号检测牛副流感病毒核酸。

巢式 RT-PCR 两轮扩增病毒 NP 核蛋白基因，提升低病毒载量呼吸道样本检出灵敏度。

SYBR Green 染料 RT-PCR，扩增病毒聚合酶基因，熔解曲线区分牛副流感与牛呼吸道其他病毒。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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