牛疱疹病毒型PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒采用成熟的荧光PCR扩增原理，针对牛疱疹病毒保守核酸序列设计专属扩增体系，可对牛各类组织、分泌物、体液样本中的牛疱疹病毒进行快速定性检测。试剂盒操作简便、检测周期短，无需复杂样本预处理，兼具高特异性与高灵敏度，可精准检出低载量病毒隐性感染样本。主要应用于牛疱疹病毒感染的临床诊断、养殖源头疫病筛查、进出口牛只检疫及疫病流行趋势监测，助力规模化牛场病毒性疫病常态化防控。

基础原理：

针对牛疱疹病毒糖蛋白 gB 保守 DNA 序列设计上下游特异性引物，常规 PCR 扩增后凝胶电泳，出现预期大小条带即为病毒核酸阳性。

荧光定量 Taqman 探针 PCR，扩增病毒即刻早期基因，扩增每循环释放荧光，通过 Ct 阈值快速定量牛疱疹病毒载量。

磁珠法提纯组织样本病毒 DNA，等温预扩增结合普通 PCR，低病毒载量样本也可高效检出，适配病牛脏器、分泌物多种检测样本。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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