同牛疱疹病毒型牛巨细胞病毒PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒基于实时荧光PCR检测技术，特异性针对牛巨细胞病毒核酸序列设计特异性引物与探针，可精准检测牛血液、组织、呼吸道分泌物等各类临床样本中的病毒核酸。试剂盒配套优化的PCR反应体系，具备灵敏度高、特异性强、抗干扰能力优异的特点，可有效区分牛巨细胞病毒与其他牛源疱疹病毒，杜绝交叉反应。适用于牛群隐性感染、潜伏感染及急性感染的快速筛查，可为牛群病毒性疫病防控、流行病学调查及养殖检疫提供精准的实验数据支撑。

基础原理：

采用特异性 Taqman 荧光探针结合病毒保守基因序列，样本核酸经高温变性、低温退火延伸扩增靶标片段，扩增过程探针水解释放荧光信号，依靠荧光强度定性判定样本含牛巨细胞病毒。

提取病牛血液、鼻拭子中总 DNA，引物特异性锁定牛巨细胞病毒衣壳蛋白编码基因，普通 PCR 扩增目的条带，琼脂糖凝胶电泳观察特异性条带完成病原检出。

一步法反转录荧光 PCR 体系，裂解液同步完成病毒核酸释放与蛋白灭活，针对病毒 DNA 聚合酶基因扩增，通过 Ct 值区分阳性感染样本与阴性健康样本。

‌操作步骤‌：

DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。

标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。

梯度稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；

依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。

所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

试剂配制（试剂准备区）

反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。

每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。

加样（样本处理区）

分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。

盖紧管盖，避免气泡干扰。

PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行定量PCR仪：

预变性：95℃ 2分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）。

‌注意事项‌：

试剂盒含生物源性质粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，阳性模板仅在生物安全柜开盖；

所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃；

试剂避免反复冻融，单次融化冰上放置不超过 2 h，使用完毕立即放回 - 20℃；

移液器吸头一次性使用，禁止重复吸取，防止交叉污染；

试剂盒仅用于科研检测，严禁人临床体外诊断；

扩增产物区产物不可带回试剂、提取区，防止气溶胶大面积污染实验室；

若阴性对照持续出现杂带，全部更换全新试剂盒，实验室台面、移液器紫外过夜消毒。

公司正在出售的产品：