CCK-8 试剂盒（Cell Counting Kit-8 ）
产品概述
Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒， 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 的 formazan (参考图 1) 。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系(图 2) 。WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和MTT 或其它MTT 类似产品，如 XTT、MTS 等相比有明显的优点：①MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的， 需要有特定的溶剂来溶解， 而WST-8 和XTT、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤；② WST-8 产生的 formazan 比XTT 和MTS 产生的 formazan 更易溶解；③WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠；④ WST-8 和MTT、XTT 等相比线性范围更宽， 灵敏度更高，并且更加稳定。 WST-8 对细胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后， 可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定*佳测定时间。
CCK-8 试剂盒（Cell Counting Kit-8 ）
操作说明
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
1) 制作标准曲线
a. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；
b. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 5-7 个细 胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔；
c. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD 值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。
2) 细胞活性检测
a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/ 孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
b. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ；
c. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
d. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
3) 细胞增殖-毒性检测
a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/ 孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
b. 向培养板加入不同浓度的待测药物；
c. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；
d. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡)；
e. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
f. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
4) 计算公式
细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%
抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ；
Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ；
Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。
Cell line : HEK293
Medium : DMEM, 10% FBS
Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours
Cell line : U87, SK-HEP1 Medium : DMEM, 10% FBS
Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)
Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours
注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。
保存条件
4°C 一年
-20°C 两年
长期保存，建议避光
注意事项
1） CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时，但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼 观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，
CCK-8 的*佳反应时间以具体显色的*佳时间为准。
2） 
使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面， 由于 96 孔板周围一圈*容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法， 改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置 于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
3） 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 4）加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。终浓度为 1 mM 的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降 低。如果终浓度是10 mM 的话，将会 100% 抑制。
5） 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
6） 本产品可以检测，但不能检测酵母细胞。向 100 μL 培养液中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培养 1-4 小时或过夜。
7） CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。
8） 要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。
9） 建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。
10） 以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板) ：
a.在显色反应后，将培养板放置 4°C 冰箱内。b.每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。
注意：反应停止后，应在 24 小时内测定。11）本产品仅限于专业人员的科学研究用， 不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
12）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
上海语纯生物科技有限公司，是由具有生命科学、生物技术背景人员共同创办的技术企业。公司主营业务:细胞系，原代细胞，原代内皮、上皮、成纤维、软骨细胞等专用培养基（可替代进口品牌例如sciencell货号：1001），细胞基础培养基及定制氨基酸缺陷培养基（例如：DMEM高糖、RPIM1640、MEM、DMEM/F12等），微生物培养基及菌种，进口胎牛血清、国产胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、马血清、无外泌体胎牛血清、透析胎牛血清等，可根据需求定制。生化试剂盒，elisa试剂盒，动物血液制品：动物血浆、动物红细胞、动物全血、动物白细胞等，感受态，各种生化试剂以及耗材。为高校、食品、医药、生物研究等领域提供相关技术支持和服务。
【特别声明】
1、细胞状态 ：冻存前确认细胞无污染且处于增殖旺盛期 ，避免使用衰老或过密细胞 ，*好是 1 天能传代一 次。
2、操作时效性 ：冻存液与细胞混合后需迅速分装冷冻 ，避免长时间暴露于室温或 4℃。
3、安全防护 ：含 DMSO 成分 ，操作时需穿戴实验服及手套 ，避免直接接触皮肤。
4、保存条件 ：冻存液开封后建议分装 ，避免反复冻融；长期存放需严格密封。
5、适用性验证：首次使用特定细胞类型时 ，建议测试冻存效果（如保存时间、复苏活率）。
6、本产品仅限于专业人员的科学研究用 ，不得用于临床诊断或治疗 ，不得用于食品或药品 ，不得存放于普通 住宅内。
7、为了您的安全和健康 ，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
| 语纯生物Nexell常用培养品目录 |
| 序号 | 产品名称 | 货号 | 品牌 | 规格 |
| 1 | 内皮细胞培养基（ECM） | CC1312 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 2 | 上皮细胞专用培养基（EpiCM） | CC1339 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 3 | 成纤维细胞专用培养基 | CC1338 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 4 | 间充质干细胞专用培养基（MSC) | CC1385 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 5 | 干细胞专用培养基 | CC1403 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 6 | 软骨细胞专用培养基 | CC1357 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 7 | 平滑肌细胞培养基（SMCM） | CC1363 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 8 | 周细胞专用培养基（PM) | CC1422 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 9 | 雪旺细胞培养基(SCM) | CC1472 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 10 | 骨骼肌细胞培养基(SkMCM) | CC1423 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 11 | 心肌细胞完全培养基(CMM) | CC0073 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 12 | 优级胎牛血清 | A5060 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 13 | 特级胎牛血清 | A5050 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 14 | 澳洲胎牛血清 | A6060 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 15 | Auckland BioSciences胎牛血清（奥克兰原装胎牛血清） | 1003-0.5L | Auckland BioSciences | 500ML |
| 16 | 马血清 | B0110 | 语纯（Nexell） | 100ML |
| 17 | 无外泌体血清 | A5055 | 语纯（Nexell） | 50ML |
| 18 | 大牛血清 | B0122 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 19 | 小牛血清 | B0121 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 20 | 新生牛血清 | B0109 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 21 | 犊牛血清 | B0487 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 22 | 透析胎牛血清 | B0204 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 23 | 胎牛血清（不含四环素） | B0207 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 24 | 碳吸附胎牛血清 | B0206 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 25 | 干细胞专用胎牛血清 | B0205 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 26 | 胎牛血清（去激素） | B0203 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 27 | 胎牛血清（无菌过滤 热灭活） | A5080 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 28 | 无糖胎牛血清 | B0494 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 29 | 胎牛血清（不含镁离子） | B0493 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 30 | 胎牛血清（不含氨基酸） | B0492 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 31 | 胎牛血清（不含硒元素） | B0491 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 32 | Nexell 无钙胎牛血清 | B0260 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 33 | 胎牛血清（不含钙镁离子） | B0498 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 34 | 青霉素-链霉素溶液（双抗） | YC-5008 | 语纯（Nexell） | 100ML |
| 35 | 0.25％胰酶 | YC-5001 | 语纯（Nexell） | 100ML |
| 36 | 0.25%胰酶含EDTA（常用） | YC-5004 | 语纯（Nexell） | 100ML |
| 37 | 0.05%胰酶溶液(含EDTA） | YC-5007 | 语纯（Nexell） | 100ML |
| 38 | 青霉素-链霉素-两性霉素B添加剂 (100×) | B0245 | 语纯（Nexell） | 100ML |
| 39 | 青霉素-链霉素-庆大霉素添加剂(100x)(三抗） | CB1345 | 语纯（Nexell） | 100ML |
| 40 | 胰岛素-转铁蛋白-硒-乙醇胺添加剂(ITS-X), 100× | CB1344 | 语纯（Nexell） | 10ml |
| 41 | 胰岛素-转铁蛋白-硒-丙酮酸钠添加剂(ITS-A), 100× | CB1343 | 语纯（Nexell） | 10ml |
| 42 | 胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂(ITS-G),100× | CB1342 | 语纯（Nexell） | 10ml |
| 43 | 氯化锂乙醇溶液(1M) | AA0307 | 语纯（Nexell） | 500ML |
| 44 | 原代细胞冻存液 | B0201 | 语纯（Nexell） | 50ml |
| 45 | NEAA 非必要氨基酸(100×) | CB1340 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 46 | D-荧光素钾盐 | CS1152 | 语纯（Nexell） | 100mg/1g |
| 47 | L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液（GlutaMAX）(200mM)，100× | B0181 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 48 | 丙酮酸钠溶液(100mM)，100× | CB1330 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 49 | 牛胰岛素 | YC-0016-a | 语纯（Nexell） | 100mg |
| 50 | 10×PBS缓冲液 (pH7.2- 7.4) 细胞培养级 | YC-5033 | 语纯（Nexell） | 500ml |
| 51 | 兔脑磷脂 | B0148 | 语纯（Nexell） | 1g |
| 52 | MEM维生素溶液（100×） | CN310 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 53 | β-巯基乙醇（55mM），1000× | CB1430 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 54 | Feto SDS-PAGE考马斯亮蓝蛋白胶极速染色液 无需脱色5分钟显色 | 18.001.03/18.001.05/18.001.10 | 语纯（Nexell） | 500ml/1000ml |
| 55 | 无血清细胞冻存液 | CM200 | 语纯（Nexell） | 100ML |
| 56 | CCK-8 试剂盒（Cell Counting Kit-8 ） | L0002 | 语纯（Nexell） | 500T |
| 57 | 软骨细胞生长因子(CGS) | B0485 | 语纯（Nexell） | 5mL |
| 58 | 间充质干细胞无血清培养基添加剂 | B0481 | 语纯（Nexell） | 25ml |
| 59 | B27神经细胞添加剂（50×），不含维生素A | B0383 | 语纯（Nexell） | 10ml |
| 60 | B27神经细胞添加剂（50×），含维生素A | B0382 | 语纯（Nexell） | 10ml |
| 61 | 骨骼肌细胞生长因子 (SkMCGS) | B0288 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 62 | 周细胞生长因子（PGS） | B0281 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 63 | 内皮祖细胞因子添加剂 | B0273 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 64 | 雪旺细胞生长因子补充剂 (SCGS) | B0264 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 65 | 星形胶质细胞因子添加剂 | B0263 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 66 | 干细胞生长因子 | B0242 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 67 | 平滑肌细胞生长因子（SMCGS） | B0213 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 68 | 成纤维细胞生长因子（FGS） | B0212 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 69 | 上皮细胞生长因子（EpiCGS） | B0211 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 70 | 内皮细胞生长因子（ECGS） | B0210 | 语纯（Nexell） | 5ml |
| 71 | 真菌清除剂（2000X） | B0224 | 语纯（Nexell） | 500ul/1ml |
| 72 | 细菌清除剂(2000X) | B0223 | 语纯（Nexell） | 500ul/1ml |
| 73 | 细胞污染高效清除剂(2000X) | B0222 | 语纯（Nexell） | 500ul/1ml |
| 74 | 支原体高效清除剂(2000X) | B0226 | 语纯（Nexell） | 500ul/1ml |
| 75 | 黑胶虫清除试剂（2000X） | B0221 | 语纯（Nexell） | 500ul/1ml |
| 76 | 水浴锅安全卫士 | B0228 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 77 | 细胞培养箱水盘安全卫士(100X） | B0229 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 78 | 实验室安全卫士(喷雾) | B0227 | 语纯（Nexell） | 500ml |
| 79 | HEPES缓冲液 （1M） | B0215 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 80 | Puromycin 嘌呤霉素 | ABT593 | 语纯（Nexell） | 25mg |
| 81 | OCT冷冻包埋剂 | B0290 | 语纯（Nexell） | 125ml |
| 82 | 牛脑垂体提取物（BPE） | B0289 | 语纯（Nexell） | 50ml |
| 83 | DPX封片剂 | D0006 | 语纯（Nexell） | 50ml |
| 84 | 氯化钾溶液(1mol/L) | AA0560 | 语纯（Nexell） | 500ml |
| 85 | L-谷氨酰胺溶液(200 mM)，100X | B0282 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 86 | 20种天然氨基酸套装 | BP0220 | 语纯（Nexell） | 20*200mg |
| 87 | DMSO | YC-5026 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 88 | 澄清瘤胃液 | S0039 | 语纯（Nexell） | 100ml |
| 89 | 克罗拉滨 | B0188 | 语纯（Nexell） | 1g |
