人细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA试剂盒

本试剂盒采用特异性夹心ELISA免疫检测原理，酶标板预先包被人SmIg特异性抗体，待测样本中的细胞膜表面免疫球蛋白与固相抗体特异性结合，洗涤去除非特异性结合物质后，加入酶标记二抗形成稳定免疫复合物，经底物显色、终止反应后检测吸光度，结合标准曲线可定量检测样本中SmIg的表达水平。
基本参数‌：

产品名称：人细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA试剂盒

英文名称：SmIg ELISA Kit
货号：Y-E2803

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.1AU/mL

检测范围：0.2～42AU/mL

反应时间：封闭 40min，细胞悬液孵育 110min，二抗 65min，避光显色 24min

保存条件：所有试剂 2～8℃，底物液全程避光操作

显色系统：稀盐酸终止双组份 TMB 显色反应

检测波长：450nm+620nm 双波长校正背景

标准曲线绘制：采用阳性参考品梯度稀释绘制半定量标准曲线

注意事项：淋巴细胞悬液需活细胞计数，死细胞会造成非特异性吸附升高本底
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 29min，抗人 Ig 包被微孔板去除封存液，洗涤缓冲液洗板 2 遍，拍干微孔水分。

排布孔位：空白对照孔、阳性标准品梯度孔、B 淋巴细胞悬液裂解样本孔；标准品孔加入 SmIg 阳性标准品 55μL，样本孔加入稀释裂解液 55μL，空白孔补稀释液。

每孔加入 HRP 标记抗人二抗 55μL，覆膜封板，37℃恒温孵育 62min。

弃去孔内反应液体，洗涤液浸泡每孔 35s 弃除，洗板 5 次，充分拍干微孔。

加入显色 A、B 液各 50μL，遮光室温显色 16min。

滴加终止液 50μL，轻微晃动终止酶促显色。

450nm 波长读数，标准曲线计算细胞膜表面免疫球蛋白含量。
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