人美丽线虫凋亡基因(CED-3)ELISA试剂盒

本试剂盒依托酶联免疫吸附双抗体夹心原理进行定量检测，酶标板微孔内预先固定CED-3特异性抗体，加入待测样本与梯度标准品后，靶标CED-3抗原与固相抗体特异性结合，再加入酶标记抗体与抗原的另一抗原位点结合，构建稳定的夹心免疫复合物，洗涤洗净未结合物质后催化底物显色，终止反应后检测吸光度，依据标准曲线数值换算，即可确定样本中CED-3的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.3 pg/mL

检测范围：1pg/mL～50pg/mL

反应时间：板内封闭 30min，样本孵育 75min，酶标二抗 40min，显色 12min，合计 157min

保存条件：所有组分 2～8℃避光，显色液单独分装避光储存，不可与氧化剂接触

显色系统：HRP 介导 TMB 显色，盐酸终止显色反应

检测波长：450nm 为主，600nm 做空白校正

标准曲线绘制：8 组标准品梯度，采用非线性拟合建立曲线，复孔差值需＜10%

注意事项：操作全程避光，显色步骤严格计时，超时会造成本底偏高
关键注意事项：

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异

所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）

避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用

洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果

显色过程需避光，避免阳光直射影响结果

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实验操作流程：

样本前处理：细胞上清样本 3000r/min 离心 10min 取上清，按照试剂盒比例稀释样本；梯度稀释 CED-3 标准品。

微孔板加样：包被微孔板中分别添加标准品、待测样本、空白对照各 100μL，做好孔位标记。

酶标记试剂加入：每孔加入 CED-3 酶结合抗体 100μL，封板膜严实密封板条边缘。

恒温结合孵育：37℃水浴环境孵育 50min，全程避光操作。

反复洗板：弃液后每孔注满洗涤液，浸泡 40s 拍干，循环洗板 6 次，彻底去除未结合游离蛋白。

避光显色：每孔添加 TMB 显色液 100μL，室温避光显色 18min。

终止定量：加入终止液终止显色，450nm 测 OD 值，绘制标准曲线计算 CED-3 表达量。