人胃泌素释放肽前体(ProGRP)ELISA试剂盒

本试剂盒运用经典双夹心酶联免疫吸附原理，固相酶标板包被抗人ProGRP特异性单克隆抗体，特异性捕获样本中的胃泌素释放肽前体，孵育结合后洗除杂质，加入酶标记配对二抗形成免疫复合物，经洗涤纯化体系后加入底物显色，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线可精准定量样本中ProGRP的表达水平。
基本参数‌：

产品名称：人胃泌素释放肽前体(ProGRP)ELISA试剂盒

英文名称：ProGRP  Elisa Kit
货号：Y-E365

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.04pg/mL

检测范围：0.08～7.6pg/mL

反应时间：37℃孵育 100min，酶结合物 63min，避光显色 14min

保存条件：整套试剂 2～8℃避光存放，不可倒置试剂瓶

显色系统：A 液基质 + B 液催化剂混合显色

检测波长：450nm+630nm 双波长扣除背景

标准曲线绘制：6 个标品梯度，软件自动拟合标准曲线方程

注意事项：反复冻融样本会造成 ProGRP 裂解，结果显著偏低
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温平衡 26min，ProGRP 包被酶标板弃保护液，洗涤缓冲液洗板 2 次，倒扣拍干微孔。

划分孔位：空白孔、倍比标准品孔、血清待测样本孔；标准品孔加入 ProGRP 标准品 50μL，样本孔加入稀释血清 50μL，空白孔补稀释缓冲液。

每孔加入酶标记检测抗体 50μL，覆膜封板，37℃孵育 66min。

弃去孔内液体，洗板液加满每孔静置 30s 倒掉，重复洗板 5 次，吸水纸彻底拍干。

依次添加显色 A 液、B 液各 50μL，遮光室温显色 13min。

加入终止液 50μL 混匀终止显色反应。

酶标仪 450nm 测 OD 值，对照曲线计算 ProGRP 浓度。
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