人特异性巨噬细胞武装因子(SMAF)ELISA试剂盒

本试剂盒运用酶联免疫双抗体夹心检测技术原理，酶标板微孔固定抗人SMAF特异性抗体，加入待测样本后，样本中的SMAF因子与固相抗体特异性免疫结合，洗涤纯化反应体系，加入HRP标记二抗形成夹心复合物，充分反应后洗去未结合抗体，加入底物显色，终止后检测吸光度，结合标准品曲线，可精准定量样本中人特异性巨噬细胞武装因子的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人特异性巨噬细胞武装因子(SMAF)ELISA试剂盒

英文名称：SMAF ELISA Kit
货号：Y-E2663

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.14pg/mL

检测范围：0.25～16pg/mL

反应时间：37℃孵育 100min，酶标二抗 60min，显色 20min

保存条件：全部组分 2～8℃避光存放，底物液严禁光照直射

显色系统：双组分 TMB 显色，酸性终止液终止

检测波长：仅 450nm 检测吸光值

标准曲线绘制：7 个梯度浓度，去除离群值后四参数拟合

注意事项：细胞上清样本需 0.22μm 滤膜过滤去除细胞碎屑
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒全部试剂室温平衡 35min，SMAF 包被板弃保护液，洗涤缓冲液洗孔 2 次，拍干备用。

设置空白孔、梯度标准孔、细胞上清样本孔；标准品孔加入 SMAF 标准品 50μL，样本孔加入稀释上清液 50μL，空白孔加稀释液。

每孔加入酶标二抗 50μL，覆膜封板，37℃孵育 65min。

弃废液，洗涤液加满每孔静置 30s 弃除，洗板 5 次，吸水纸彻底拍干。

每孔依次加显色 A、B 液各 50μL，避光室温显色 14min。

加入终止液 50μL 混匀终止酶反应。

酶标仪 450nm 读取 OD 值，定量计算 SMAF 因子浓度。
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