人丝狀血球凝集素(FHA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板固相包被人丝状血球凝集素(FHA)特异性抗体，待测样本与标准品中的FHA抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入酶标记配对抗体，形成稳定免疫复合物，经底物显色、终止反应后检测吸光度，数值大小对应样本中FHA的浓度水平，可完成定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人丝狀血球凝集素(FHA)ELISA试剂盒

英文名称：FHA ELISA Kit
货号：Y-E2979

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 8.5pg/mL

检测范围：50pg/mL ~ 2400pg/mL

反应时间：37℃孵育 105min，酶二抗 72min，底物显色 30min，总时长 3h27min

保存条件：试剂盒 2~8℃避光，属于病原抗原检测试剂，需单独冷藏不可与普通试剂混放

显色系统：即用型 TMB 显色底物，酸性终止液终止变色

检测波长：450nm 搭配 620nm 双波长读数

标准曲线绘制：百日咳杆菌 FHA 标准品梯度稀释，线性回归绘制曲线，6 个梯度点

注意事项：呼吸道分泌物样本需除菌预处理；操作严格遵循微生物实验生物安全规范
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒所有组分室温平衡 28min，稀释洗涤缓冲液，逐级配制 FHA 标准品梯度稀释液，标记孔位。

标准品孔加 50μL 不同浓度 FHA 标准溶液；待测孔加 46μL 稀释液 + 14μL 待测样本；空白孔不加试剂。

除空白孔外每孔加入 HRP 标记特异性抗体 100μL，封板 37℃孵育 70min。

弃液洗板，洗涤液注满每孔静置 39s，甩干循环 6 次，彻底拍干微孔板。

每孔加入显色底物双液各 50μL，轻震混匀，避光显色 18min。

加入终止液 50μL 混匀终止酶促显色。

450nm 读取 OD 值，对照标准曲线计算 FHA 浓度。
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