人水闸蛋白14(CLDN14)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固相包被人水闸蛋白14(CLDN14)特异性抗体，加入待测样本与梯度标准品，样本中的CLDN14抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质后加入酶标记配对抗体，形成夹心免疫复合物，底物显色终止后测定吸光度，数值与样本中CLDN14蛋白含量呈线性正相关，可完成样本靶标的定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人水闸蛋白14(CLDN14)ELISA试剂盒

英文名称：CLDN14 ELISA Kit
货号：Y-E2948

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.54ng/mL

检测范围：3.2ng/mL ~ 890ng/mL

反应时间：37℃孵育 83min，二抗结合 54min，底物显色 20min，总时长 2h37min

保存条件：2~8℃避光存放整套试剂盒，干粉标准品 - 20℃长期保存，复溶后 24h 内用完

显色系统：即用型 TMB 显色底物，2mol/L 硫酸终止

检测波长：450nm 主波长，630nm 参比波长

标准曲线绘制：半对数线性拟合，6 个标准稀释梯度

注意事项：肾小管上皮细胞上清样本需过滤杂质；加样不可溢出孔外造成孔间串色
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒所有试剂室温平衡 32min，稀释洗涤缓冲液，逐级配制 CLDN14 标准品梯度液，密封未使用板条。

标准品孔加 50μL 不同浓度 CLDN14 标准溶液；样本孔加 45μL 稀释液 + 15μL 待测样本；空白孔不加试剂。

除空白孔外每孔加入 HRP 标记抗 CLDN14 抗体 100μL，封板 37℃孵育 69min。

弃液洗板，洗涤液浸泡每孔 37s 甩干，重复洗板 5 次，拍干微孔板残留液体。

每孔加入显色底物 A、B 液各 50μL，轻震混匀，37℃避光显色 18min。

加入终止液 50μL 混匀终止酶促显色反应。

450nm 波长测定吸光度，标准曲线计算 CLDN14 浓度。
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