人瘦素受体(LEPR)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，96孔微孔板固定人瘦素受体(LEPR)特异性抗体，样本与标准品中的LEPR抗原与固相抗体特异性免疫结合，洗涤去除未结合物质后加入酶标记检测抗体，形成稳定夹心复合物，经底物显色、终止反应后检测吸光度，数值高低对应样本中LEPR的浓度，通过标准曲线可准确计算靶标含量。
基本参数‌：

产品名称：人瘦素受体(LEPR)ELISA试剂盒

英文名称：LEPR ELISA Kit
货号：Y-E2525

规格：48T/96T

灵敏度：检出限 0.09ng/mL

检测范围：0.6ng/mL ~ 140ng/mL

反应时间：37℃孵育 71min，二抗温育 51min，底物显色 18min，总用时 2h20min

保存条件：未拆封 2~8℃，分装浓缩试剂可 - 20℃冻存 6 个月，开封板条密封防潮

显色系统：A、B 显色液分开添加混匀终止

检测波长：仅 450nm 波长检测

标准曲线绘制：五参数非线性拟合，8 个标准品梯度点

注意事项：肥胖与消瘦个体基线差异大，需设置同批次对照样本；样本不可溶血
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 31min，稀释浓缩洗涤液，梯度稀释 LEPR 标准品，拆分实验用板条。

标准品孔加入 50μL 梯度 LEPR 标准液；样本孔加 43μL 稀释液 + 7μL 样本；空白孔无加样。

检测孔加入酶标记抗 LEPR 抗体 100μL，封板 37℃孵育 68min。

倒掉孔内废液，洗涤液浸泡每孔 35s 甩干，洗板 6 次，充分拍干板条。

每孔加入显色双液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 17min。

加入终止液 50μL 混匀终止酶促反应。

酶标仪 450nm 测吸光度，绘制标准曲线定量 LEPR 浓度。
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