人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员2(EAR2)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，微孔板预先包被人嗜酸性白血球相关RNA水解酵素家族成员2(EAR2)特异性抗体，加入样本与标准品后，EAR2抗原与固相抗体特异性结合，洗涤纯化体系后加入酶标记二抗，形成稳定免疫复合物，酶促显色终止后检测吸光度，吸光度与样本中EAR2含量成正比，可实现定量分析。
基本参数‌：

产品名称：人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员2(EAR2)ELISA试剂盒

英文名称：eosinophil-associated ribonuclease A family member 2  Elisa Kit
货号：Y-E901

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 4.5pg/mL

检测范围：26pg/mL ~ 1050pg/mL

反应时间：样本孵育 67min，二抗结合 53min，避光显色 21min，总用时 2h21min

保存条件：2～8℃储存全套试剂，浓缩洗涤液室温放置即可，无需低温保存

显色系统：预装 TMB 显色液，2mol/L 硫酸终止变色

检测波长：450nm+620nm 双波长读数

标准曲线绘制：半对数线性拟合标准曲线，6 个浓度梯度

注意事项：支气管肺泡灌洗液样本需过滤除菌后检测；加样枪头一次性更换，防止交叉污染
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒全部试剂室温平衡 33min，稀释洗涤缓冲液，逐级配制 EAR2 标准品梯度液，准备酶标板。

标准孔加 50μL 不同浓度 EAR2 标准溶液；待测孔加 44μL 稀释液 + 16μL 待测样本；空白孔不加液体。

除空白孔外每孔加入 HRP 标记抗体工作液 100μL，封板 37℃孵育 71min。

弃液洗板，洗涤液加满每孔静置 38s，甩干重复 6 次，拍干微孔板残液。

每孔加入显色 A、B 液各 50μL，轻微震荡，37℃避光显色 19min。

每孔加注终止液 50μL 混匀终止反应。

450nm 读取吸光度，拟合标准曲线计算 EAR2 含量。
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