人嗜铬蛋白A(CgA)ELISA试剂盒

本试剂盒运用经典双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，96孔板固相固定人嗜铬蛋白A(CgA)特异性抗体，加入待测样本与标准品后，样本中的CgA抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合游离物质，加入酶标记检测抗体形成夹心复合物，底物显色后终止反应，检测吸光度值，其与样本中CgA含量呈正相关，可精准定量样本中靶标蛋白浓度。
基本参数‌：

产品名称：人嗜铬蛋白A(CgA)ELISA试剂盒

英文名称：CgA   Elisa Kit
货号：Y-E279

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.12ng/mL

检测范围：0.7ng/mL ~ 180ng/mL

反应时间：室温孵育 90min，酶标二抗 65min，底物显色 24min，总时长 3h19min

保存条件：试剂盒 2-8℃避光，拆分板条密封加干燥剂冷藏，标准品复溶后一次性使用

显色系统：双液配比显色体系，硫酸终止变色

检测波长：450nm 主波长，620nm 参比波长

标准曲线绘制：四参数拟合标准曲线，7 个梯度稀释点

注意事项：采血后尽快分离血清，CgA 易粘附于血细胞；严重溶血样本直接舍弃
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂室温复温 29min，配制洗涤工作液，倍比稀释 CgA 标准品，规划酶标板孔。

标准品孔添加 50μL 不同浓度标准品；样本孔加 49μL 稀释液 + 11μL 待测样本；空白孔空置。

非空白孔加入酶偶联抗体 100μL，封板膜密封，37℃孵育 63min。

撕膜弃液，洗涤液浸泡每孔 35s，甩干重复洗板 5 次，拍干板内残液。

每孔加入显色双液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 16min。

滴加终止液 50μL 混匀终止反应。

酶标仪 450nm 读数，换算样本 CgA 浓度。
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