人神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，固相微孔板包被有抗人神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)特异性抗体，加入待测样本与系列标准品后，样本中的NAIP抗原与固相抗体特异性结合，洗涤纯化体系后加入酶标记检测抗体，构建抗体-抗原-酶标抗体夹心复合物，经底物显色、终止反应后，利用酶标仪检测光学吸光度，吸光度与样本中NAIP蛋白浓度呈正相关，依托标准曲线即可实现样本NAIP含量的精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 5.6pg/mL

检测范围：30pg/mL ~ 1200pg/mL

反应时间：37℃孵育样本 75min，酶标记物孵育 52min，避光显色 24min，总时长 2h21min

保存条件：试剂盒整体 2～8℃冷藏，终止液常温密闭储存，标准品复溶后 - 20℃可分装保存 1 个月

显色系统：A、B 液分开配比混合显色，强酸终止反应

检测波长：450nm 为主，650nm 作为参比波长

标准曲线绘制：五参数非线性拟合，6 组标准浓度点，空白对照孔基线校正

注意事项：样本避免反复冻融，冻融次数不可大于 3 次；显色阶段严格避光，强光会造成底物提前失效
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

所有试剂室温放置 32min，配制洗涤工作液，梯度稀释 NAIP 标准品，取出实验所需酶标板条，剩余板条密封冷藏。

标准孔加 50μL 对应浓度 NAIP 标准品；样本孔加 42μL 样本稀释液 + 8μL 待测样本；空白孔不加液。

非空白孔加入酶偶联抗 NAIP 抗体 100μL，封板膜密封，37℃孵育 62min。

撕膜弃液，洗涤液注满每孔浸泡 35s，甩干，重复洗板 5 次，吸水纸拍干。

每孔依次加显色 A、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光反应 14min。

每孔滴加终止液 50μL，混匀终止显色。

450nm 测定吸光度，根据标准曲线计算样本 NAIP 浓度。