人杀伤细胞凝集素样受体(KLR)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，酶标板微孔包被抗人杀伤细胞凝集素样受体特异性抗体。样本中的KLR抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入HRP标记检测抗体，形成完整的免疫复合物，经底物显色、终止反应后测定吸光度，依据标准曲线定量检测样本中KLR蛋白的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出 0.098ng/mL

检测范围：0.31ng/mL～19.84ng/mL

反应时间：室温夹心孵育 63min，37℃酶结合物 55min，显色 18.8min

保存条件：2～8℃竖直存放，浓缩洗涤液稀释后 7 天内用完

显色系统：双组份现配 TMB 显色液

检测波长：450nm+630nm 双波长校正

标准曲线绘制：五次多项式回归构建标准曲线

注意事项：样本不可反复冻融超过 2 次，膜受体蛋白脱落会导致定量结果偏差
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒全部组分室温平衡 35min，按比例稀释洗涤液；组装酶标板区分三类孔位。

标准品孔添加梯度稀释 KLR 标准品 50μL，样本孔加入预处理待测样本 50μL，空白孔不加试剂。

所有检测孔加入一步法酶标记抗体工作液 100μL，密封封板膜。

37℃避光孵育 70min，适配膜受体蛋白检测孵育要求。

倾倒废液，洗涤液洗板 4 次，每次浸泡 38s，吸水纸拍净孔底残留液体。

每孔加入显色底物 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 17min。

加入终止液终止反应，酶标仪 450nm 读取 OD 值，绘制曲线计算 KLR 浓度。