人杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附技术原理，酶标板微孔预先包被抗人杀伤细胞免疫球蛋白样受体特异性抗体。检测时，样本中的KIR抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合物质后，加入酶标记配对抗体形成夹心免疫复合物，经显色、终止反应后读取吸光度，通过标准曲线完成靶蛋白的定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：检测极限 0.091ng/mL

检测范围：0.29ng/mL～18.56ng/mL

反应时间：样本孵育 70min，二抗温育 57min，显色 20.2min

保存条件：试剂盒外包装避光密封，2～8℃储存，拆封板条干燥剂封存

显色系统：单组份稳定 TMB 显色体系

检测波长：450nm/620nm 双波长

标准曲线绘制：非线性四参数拟合标准曲线

注意事项：外周血淋巴细胞裂解样本需过滤去除细胞碎片，避免非特异性吸附
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温复温 30min，稀释浓缩洗涤缓冲液；拆分酶标板条做好孔位标记。

梯度 KIR 标准品 50μL 加入标准孔，稀释后待测样本 50μL 加入样本孔，空白孔留空。

非空白孔加入一步法酶结合二抗工作液 100μL，封板封口混匀体系。

37℃恒温避光孵育 66min，全程避光静置反应。

弃液洗板 5 次，每次洗涤液浸泡 33s，彻底去除非特异性吸附杂质，拍干水分。

每孔加入显色 A 液、B 液各 50μL，37℃避光显色 16min。

滴加终止液 50μL 混匀，10min 内 450nm 测定吸光度，定量 KIR 受体表达量。