人溶血补体(Hc)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，酶标板微孔预先包被抗人溶血补体特异性抗体。检测时，样本中的Hc组分与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质，加入酶标记检测抗体形成夹心免疫复合物，经底物显色、终止反应后读取吸光度值，根据标准曲线梯度定量检测样本中溶血补体的含量。
产品参数：

‌灵敏度：检测下限 0.063μg/mL

检测范围：0.19μg/mL～12.16μg/mL

反应时间：37℃温育 54min，酶标二抗 47min，显色 14.5min

保存条件：2～8℃储存，补体蛋白对温度敏感，试剂全程避免室温长时间放置

显色系统：单组份稳定 TMB 显色液

检测波长：450nm 主波长，630nm 参比

标准曲线绘制：非线性四参数拟合标准曲线

注意事项：新鲜采血后尽快分离血清，离体过久补体自动活化降解，结果失真
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒试剂室温回温 30min，稀释浓缩洗涤缓冲液；按需拆板标记孔组信息。

梯度 Hc 标准品 50μL 加入标准孔，预处理待测血清 50μL 加入样本孔，空白孔留空。

所有检测孔加入一步法酶标记检测抗体 100μL，封板后轻微震荡混匀。

37℃恒温避光孵育 60min，维持环境温度稳定。

弃去孔内液体，洗涤液洗板 5 次，每次浸泡 30s，甩出后充分拍干。

每孔加入显色 A 液、B 液各 50μL，37℃避光显色 15min。

滴加终止液 50μL 混匀，10min 内 450nm 读取 OD 值，测定溶血补体含量。