人缺血修饰白蛋白(IMA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔包被抗人缺血修饰白蛋白特异性抗体。检测过程中，样本中的IMA与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入辣根过氧化物酶标记检测抗体，形成稳定的免疫夹心复合物，经底物显色、终止反应后测定吸光度，吸光度与IMA含量正相关，通过标准曲线完成定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最小可测 2.5U/mL

检测范围：7U/mL～448U/mL

反应时间：37℃结合孵育 53min，酶标二抗 46min，避光显色 13.5min

保存条件：2～8℃储存，白蛋白类标准品不可反复冻融，建议分装保存

显色系统：1:1 混合 A、B 底物液显色

检测波长：450nm 主波长，630nm 参比

标准曲线绘制：四参数竞争法拟合标准曲线

注意事项：溶血样本白蛋白结构改变，会造成 IMA 结果假性升高，严禁使用溶血血清
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

全部试剂室温平衡 30min，稀释浓缩洗涤液；按需拆分酶标板条，标注孔组信息。

标准孔加入倍比稀释 IMA 标准品 50μL，待测孔加入稀释血清样本 50μL，空白孔不加试剂。

非空白孔加入一步法酶联检测抗体工作液 100μL，密封封板膜。

37℃避光孵育 62min，静置孵育不移动板子。

洗板 4 次，每次洗涤液浸泡 38s，甩干后吸水纸吸干孔内残液。

每孔依次加入显色 A、B 液各 50μL，避光 37℃显色 16min。

滴加终止液终止反应，酶标仪 450nm 检测 OD 值，计算缺血修饰白蛋白含量。