人类似RIKEN cDNA 4931408D14 基因 ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA核心原理，微孔板包被4931408D14基因编码蛋白特异性捕获抗体，孵育过程中样本内靶蛋白与抗体特异性结合，再加入酶标记检测抗体构建免疫夹心结构，洗涤后催化底物显色，吸光度数值随靶蛋白浓度升高而增大，对照标准曲线即可精准定量检测样本中该靶蛋白的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出限 0.025ng/mL

检测范围：0.1ng/mL–9ng/mL

反应时间：一抗 65min，二抗 35min，显色 10min，合计 110min

保存条件：未拆封 2–8℃，拆封后各组分分类密封冷藏

显色系统：双组分 TMB 显色

检测波长：450nm

标准曲线绘制：七梯度标准品，四参数 Logistic 回归建模

注意事项：洗涤液稀释用水需为去离子纯水，不可用自来水
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

样本制备：待测体液 / 细胞上清样本离心取上清，按说明书比例稀释混匀；

加样上板：酶标板各孔依次添加标准品、待测样本、空白稀释液，每孔 100μL；

一步孵育结合：直接加入酶标记工作液，密封后 37℃孵育 62min；

多次洗板：弃净孔内液体，洗涤液注满微孔静置 32s，拍干，洗板 6 次；

底物显色：加入显色混合液，避光环境下显色 13min；

终止反应：滴加终止液终止反应，轻摇酶标板混匀；

检测分析：酶标仪检测 450nm OD 值，对照标准曲线计算靶标表达量。