人类白细胞抗原E(HLA-E)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，利用预包被于微孔板中的特异性HLA-E单克隆抗体，结合样本中的人类白细胞抗原E，再加入酶标记的二抗与结合的抗原特异性结合，通过洗涤去除未结合的游离物质，加入底物发生显色反应，样本中HLA-E的含量与显色深浅呈正相关，最终通过酶标仪测定吸光度，对照标准曲线即可精准计算样本中HLA-E的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出浓度≤0.05ng/mL

检测范围：0.15ng/mL–10ng/mL

反应时间：样本孵育 60min，二抗孵育 30min，底物显色 15min，总操作时长约 2.5h

保存条件：未开封试剂盒 2–8℃避光保存；开封后板条密封 2–8℃可存 1 个月，其余组分 2–8℃

显色系统：TMB 单组分显色液

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，采用四参数 Logistic 拟合生成标准曲线

注意事项：洗板务必充分，避免非特异性结合；底物避光操作，显色超时立即终止反应
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

样本稀释：按照试剂盒说明书推荐比例稀释待测血清 / 血浆样本，充分混匀后室温静置 5min 备用；

板条加样：取出预包被酶标板，每孔依次加入稀释后待测样本、标准品、空白对照各 100μL，设置复孔；

一步孵育：直接加入酶结合工作液 50μL，封板膜密封酶标板，37℃恒温孵育 60min；

洗板操作：揭去封板膜，弃去孔内液体，每孔加满洗涤液浸泡 30s 后甩干，重复洗板 5 次，拍干板孔残留液体；

底物显色：每孔快速加入显色液 A、显色液 B 各 50μL，避光室温孵育 15min 进行显色反应；

终止反应：每孔立即加入终止液 50μL，轻柔晃动酶标板 30s 终止显色；

读数计算：15min 内使用酶标仪 450nm 波长测定各孔 OD 值，依据标准品曲线换算样本 HLA-E 浓度。