人羟基胶原吡啶交联(OH-PYD)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA技术原理，酶标板微孔预先包被抗人羟基胶原吡啶交联特异性抗体。加入待测样本后，样本中的OH-PYD组分与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质，加入酶标记配对抗体孵育形成免疫复合物，经显色、终止反应后检测吸光度，根据吸光度与待测物浓度的正相关关系，结合标准曲线完成定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最小检出 0.09nmol/L

检测范围：0.27nmol/L～17.28nmol/L

反应时间：37℃孵育 59min，酶标二抗 50min，显色 17.5min

保存条件：试剂盒 2～8℃竖直放置，微孔板避免挤压导致包被层脱落

显色系统：一体式 TMB 显色工作液

检测波长：450nm/650nm 双波长校正

标准曲线绘制：对数浓度线性回归绘制曲线

注意事项：尿液样本需过滤去除结晶杂质，稀释倍数严格按照说明书配比
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温放置 30min，稀释浓缩洗涤液；拆分酶标板条并做好孔位标记。

标准孔加入梯度 OH-PYD 标准品 50μL，待测孔加入稀释后样本 50μL，空白孔空置不加样。

各检测孔加入一步法酶标记一抗工作液 100μL，封板膜密封。

37℃避光孵育 70min，延长孵育保证小分子结合。

洗板 5 次，每次洗涤液浸泡 30s，甩出液体后彻底拍干。

依次添加显色 A、B 底物各 50μL，避光 37℃显色 17min。

终止液终止显色，450nm 测 OD 值，绘制标准曲线计算 OH-PYD 含量。