人前列环素(PGI)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附检测原理，酶标板微孔包被纯化的人前列环素抗原。检测时，样本中的PGI抗原与固相抗原竞争结合体系中的酶标特异性抗体，孵育反应后充分洗涤，加入底物液显色，样本中前列环素含量越高，竞争结合的酶标抗体越少，显色越浅，终止反应后测定吸光度，依据竞争抑制曲线，即可精准定量样本中PGI的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 2.2pg/mL

检测范围：6pg/mL～384pg/mL

反应时间：竞争性结合孵育 90min，二抗反应 70min，显色 25min

保存条件：2～8℃全程避光，前列环素易降解，试剂严禁室温久放

显色系统：A+B 液配比 1:1 配制显色液

检测波长：450nm 单波长

标准曲线绘制：竞争性 ELISA 专用四参数反相拟合曲线

注意事项：样本采集后立即加抗凝剂并冰上转运，室温放置超过 30min 样本失效
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒组分室温回温 28min，配比稀释洗涤液；取出所需包被板条，做好标记。

梯度 PGI 标准品 50μL 加入标准孔，待测样本 50μL 加入样本孔，空白孔留空。

所有检测孔加入一步法酶结合二抗工作液 100μL，密封封板。

37℃避光孵育 55min，减少光线影响底物活性。

倾倒废液，洗涤液洗板 5 次，每次浸泡 33s，彻底拍干孔内液体。

每孔加入显色底物 A、B 各 50μL，37℃避光显色 12min。

加入终止液 50μL 混匀，15min 内 450nm 读数，定量样本前列环素含量。