人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典双抗体夹心酶联免疫检测原理，酶标板微孔预先包被针对人葡萄糖激酶调节蛋白的特异性抗体。检测体系中，样本中的GKRP抗原可与固相抗体特异性识别并结合，洗涤去除未结合物质后，加入辣根过氧化物酶标记的配对抗体，形成特异性免疫夹心复合物，经底物显色、终止反应后，利用酶标仪测定吸光度，根据吸光度与抗原浓度的正相关关系，通过标准曲线计算样本中GKRP的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出极限 0.11ng/mL

检测范围：0.4ng/mL～25.6ng/mL

反应时间：样本孵育 75min，酶标抗体孵育 60min，显色 22min

保存条件：2～8℃冷藏，试剂盒外包装箱防潮；开封试剂 1 个月内用完

显色系统：HRP-TMB 一步式显色液

检测波长：仅 450nm 波长读数

标准曲线绘制：四参数 Logistic 曲线拟合，软件自动扣空白后绘图

注意事项：洗板步骤必须彻底，残留洗涤液会稀释底物降低显色强度
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒所有液体试剂室温放置 30min，按说明书比例稀释洗涤液；固定酶标板，划分孔组。

标准品孔上样梯度 GKRP 标准品 50μL，待测孔加入稀释样本 50μL，空白孔不加液。

每孔加入一步法酶联检测抗体工作液 100μL，封板膜封口混匀。

37℃恒温避光孵育 60min，静置孵育不晃动板体。

弃液后每孔加满洗涤液浸泡 30s，甩干重复 5 次洗板，拍干孔内水分。

依次添加显色 A、B 液各 50μL，避光 37℃显色 15min。

终止液 50μL 终止显色，酶标仪 450nm 检测吸光值，对照标准曲线定量 GKRP。