人可溶性CD28(sCD28)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，预先将抗人可溶性CD28（sCD28）抗体包被于微孔板固相载体，待测样本中的sCD28抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离组分后加入酶标记检测抗体，形成稳定夹心复合物，底物显色后通过吸光度检测，定量分析样本中sCD28的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 0.25 pg/mL

检测范围：0.125 pg/mL ~ 8 pg/mL

反应时间：孵育 70min，二抗 40min，显色 16min

保存条件：2~8℃储存，不可冷冻，板条拆分后密封加干燥剂

显色系统：双组份 TMB 显色体系

检测波长：450nm/630nm 双波长校正

标准曲线绘制：倍比稀释标准品上机检测，软件自动拟合曲线定量

注意事项：溶血样本会破坏抗原结构，直接弃用不可检测
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温复温 30min，取用实验用板条，规划所有实验孔位。

各加样孔加入标准品或稀释样本 50μL，随即加入酶结合工作液 50μL，封板封口。

混匀微孔液体，37℃孵育 60min。

撕膜倒液，洗液浸泡 30s，拍干，洗板 5 次。

显色底物 A、B 各 50μL，避光显色 15min。

终止液 50μL 添加混匀终止。

450nm 波长检测吸光度，计算 sCD28 含量。