人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，固相酶标板预包被人凝血因子Ⅶ特异性捕获抗体，孵育时样本中的FⅦ抗原与固相抗体特异性结合，加入酶标记检测抗体形成免疫复合物，洗涤去除杂质后启动酶促显色反应，显色深浅对应样本中FⅦ含量，通过标准曲线换算完成精准定量。
产品参数：

‌灵敏度：0.21 μg/mL

检测范围：1.5μg/mL～155μg/mL

反应时间：37℃孵育 104min，二抗 48min，显色 15min，总 167min

保存条件：2～8℃冷藏，凝血因子标准品 - 20℃冻存

显色系统：单组份 TMB 显色终止

检测波长：450nm 单波长读数

标准曲线绘制：6 梯度标准品，线性拟合曲线

注意事项：血浆必须使用枸橼酸钠抗凝，比例 1:9 严格配比
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂与样本准备：试剂盒室温平衡 28min，稀释洗涤液，梯度配制 FⅦ 标准品，血浆样本低温离心取上清。

微孔加样：标准孔、样本孔、空白孔分别加入 100μL 对应液体。

一步法酶抗加入：每孔添加 HRP 标记 FⅦ 检测抗体 100μL，封板封口震荡 30s。

恒温结合孵育：37℃避光孵育 57min。

洗板步骤：倒掉废液，洗液浸泡 35s 拍干，循环洗板 6 次。

TMB 显色：加入显色 A、B 液各 50μL，暗处显色 18min。

终止定量：终止液终止酶反应，450nm 测 OD 值，换算凝血因子 Ⅶ 浓度。