人尿游离皮质醇(UFC)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法ELISA检测原理，酶标板预先包被UFC特异性抗原，待测样本中的尿游离皮质醇与固相抗原竞争结合有限的酶标记特异性抗体，样本中UFC含量越高，结合的酶标抗体越少，底物显色越浅，终止反应后检测吸光度，结合竞争法标准曲线，反向定量测定样本中UFC的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：0.03 μg/dL

检测范围：0.1μg/dL～18μg/dL

反应时间：样本孵育 132min，酶标二抗 66min，显色 19min，总 217min

保存条件：2～8℃冷藏，类固醇标准品 - 20℃冻存

显色系统：单液 TMB 显色，硫酸终止

检测波长：450nm 单波长检测

标准曲线绘制：8 个低浓度梯度，四参数 Logistic 建模

注意事项：样本采集避免光照，皮质醇见光易分解
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

样本前处理：尿液样本常温静置离心取上清，稀释待测样本；梯度配制 UFC 标准品梯度液。

板孔点样：各微孔加入标准品、待测尿上清、空白对照液 100μL。

酶结合物添加：每孔加入酶标记抗 UFC 抗体 100μL，封板膜封口震荡 30s。

免疫孵育：37℃避光孵育 55min。

洗板去污：弃液后洗液浸泡 30s 拍干，连续洗涤 5 次。

底物显色：加入显色工作液，避光显色 17min。

终止检测：终止液终止反应，450nm 测定 OD 值，依据曲线得到 UFC 浓度。