人抗硬皮病抗体70(SCL70/topoⅠ)ELISA试剂盒

本试剂盒运用ELISA间接法检测原理，将纯化的硬皮病70KD抗原（拓扑异构酶Ⅰ）包被于微孔板固相载体，待测样本中的抗SCL70抗体与固相抗原特异性结合，洗板后加入酶标记抗人IgG二抗，特异性结合免疫复合物，底物催化显色后测定吸光度，数值大小与样本中SCL70抗体含量成正比，可精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最小检出 0.5 AU/mL

检测范围：0.4 AU/mL ~ 25.6 AU/mL

反应时间：样本孵育 95min，酶二抗 50min，显色 20min

保存条件：2~8℃避光，浓缩试剂出现沉淀需摇匀溶解后使用

显色系统：双液 TMB 显色，终止液终止反应

检测波长：450nm，参考 620nm

标准曲线绘制：X 轴浓度、Y 轴 OD 值，四参数 Logistic 方程绘制曲线定量

注意事项：洗板步骤每孔洗涤不少于 5 次，防止非特异性结合
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂盒室温放置 30min，取出酶标板，设置标准梯度孔、阴性阳性对照孔、待测样本孔。

每孔添加标准品或稀释血清样本 50μL，马上加入酶偶联工作液 50μL，密封封板。

震荡混匀微孔液体，37℃孵育 60min。

撕膜倒液，洗涤液浸泡 30s，吸水纸拍干，洗板 5 轮。

显色底物 A、B 各 50μL / 孔，避光 37℃显色 15min。

终止液 50μL 加入各孔，摇晃终止反应。

酶标仪 450nm 测定 OD 值，绘制标准曲线定量 SCL70 抗体。