人免疫球蛋白重链可变区(IgHV)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔固定IgHV特异性抗体，孵育时样本中的免疫球蛋白重链可变区抗原与固相抗体特异性结合，再加入酶标记抗体形成免疫复合物，洗涤去除杂质后启动酶促显色反应，显色深浅对应样本中IgHV含量，通过酶标仪读数和标准曲线换算完成精准定量。
产品参数：

‌灵敏度：0.27 ng/L

检测范围：4ng/L～260ng/L

反应时间：37℃孵育 98min，酶结合物 52min，显色 15min，总 165min

保存条件：避光 2～8℃保存，底物液单独避光存放

显色系统：TMB 单组份显色液终止后读数

检测波长：450nm

标准曲线绘制：6 梯度标准品，非线性回归绘制曲线

注意事项：微孔板孵育必须加盖封板膜，防止液体挥发
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂回温与稀释：试剂盒全部组分室温放置 30min，稀释洗涤液，配制 IgHV 梯度标准品。

板孔点样：每孔加入标准品、待测样本、空白试剂 100μL，做好编号记录。

一步共孵加酶抗：所有反应孔加入酶标记 IgHV 抗体 100μL，封板震荡 30s 混匀。

恒温避光孵育：37℃孵育 50min。

洗板除杂：弃净孔内液体，洗液浸泡 25s 拍干，洗板 5 次。

TMB 显色：加入显色混合底物，避光显色 16min。

终止检测：加入终止液终止反应，450nm 测定 OD 值，定量 IgHV 含量。