人晶体蛋白β(Cryβ)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板预先包被人β晶体蛋白特异性捕获抗体，加入待测样本后，样本中的Cryβ抗原与固相抗体特异性结合；充分孵育并洗涤纯化体系后，加入酶标记Cryβ检测抗体，形成夹心式免疫复合物；通过酶促显色反应生成有色产物，吸光度值与样本中β晶体蛋白含量呈正相关，对照标准曲线可精准定量样本中靶蛋白浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低可测 3.6pg/mL

检测范围：7.2~461pg/mL

反应时间：温育 68min，酶结合物 33min，显色 11min

保存条件：整套试剂 2~8℃，稀释后洗涤液不可长期存放

显色系统：A+B 等量混合后进行显色反应

检测波长：450nm 单一波长检测吸光度

标准曲线绘制：二次多项式拟合标准曲线，梯度标品录入后生成换算公式

注意事项：样本避免反复冻融；加样时不要触碰微孔板包被底面；底物液避免接触皮肤
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒常温放置 30min，取用酶标板条，排布标准品孔、待测样本孔、空白孔，每孔加入稀释后样品 100μL，空白孔添加稀释缓冲液。

直接向各孔加入酶结合抗体液 55μL，轻柔摇匀后封板密封。

37℃避光孵育 64min，酶标板放置平稳不可移位。

撕膜倒净废液，洗板液加满每孔静置 30s，拍干，重复洗板 5 次。

依次添加显色 A、B 液各 50μL，避光 37℃显色 17min。

每孔加入终止液 50μL，混匀终止显色过程。

450nm 酶标仪测定吸光值，空白调零，对照标准曲线定量 Cryβ 浓度。