人抗髓磷脂抗体IgA(AMA IgA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接酶联免疫吸附检测原理，微孔板预包被纯化的人髓磷脂抗原，待测样本中的抗髓磷脂IgA抗体可与固相髓磷脂抗原特异性结合，孵育后洗除非特异性结合物质；加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgA特异性二抗，与复合物中的AMA IgA抗体精准结合，避免其他免疫球蛋白干扰；再次洗板后加入底物显色，显色强度与样本中AMA IgA抗体含量成正比，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线实现特异性定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人抗髓磷脂抗体IgA(AMA IgA)ELISA试剂盒

英文名称：AMA IgA   Elisa Kit
货号：Y-E419

规格：48T/96T

灵敏度：0.52RU/mL

检测范围：1.04RU/mL - 33.28RU/mL

反应时间：两步孵育分别 66min、39min，显色 14min

保存条件：试剂盒 2~8℃，终止液常温密闭存放即可

显色系统：单组分 TMB 显色液

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数 Logistic 拟合，空白孔扣除背景值后计算浓度

注意事项：多发性硬化症辅助筛查，中枢神经系统炎症可造成一过性升高
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温放置 32min，取出酶标板，规划孔位排布并标记，剩余未用板条密封冷藏避光保存。

稀释后待测样本加入样本孔 54μL，阴性、阳性对照孔加入对应对照品 54μL，空白孔空置不加试剂。

一步法直接滴加酶结合标记液 54μL 至所有检测孔，封板严实封口，低速震荡混匀孔内液体。

37℃恒温孵育 70min，酶标板单层平放，不可叠加堆放。

去除封板膜，倒净废液，洗涤液灌满每孔浸泡 39s 后甩干，重复洗板 5 次，充分去除未结合反应物。

每孔依次加入显色 A、B 液各 50μL，避光条件下 37℃显色 9min。

加入终止液 50μL 终止反应，混匀后酶标仪 450nm 读取 OD 值，对照标准曲线定量 IgA 型髓磷脂抗体。
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