人脊髓灰质炎病毒IgG(PV-IgG)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接酶联免疫吸附试验原理，预先将纯化的脊髓灰质炎病毒抗原包被于微孔板孔内，封闭非特异性结合位点后，加入待测人血清样本，样本中若存在脊髓灰质炎病毒IgG抗体，可与固相抗原特异性结合；充分洗涤去除未结合物质后，加入酶标记抗人IgG二抗，使其与结合在固相上的特异性抗体结合，再次洗涤干净后加入底物显色液进行显色反应，最后加入终止液终止反应，通过酶标仪测定各孔吸光度值，吸光度值与样本中人脊髓灰质炎病毒IgG抗体含量呈正相关，对照标准曲线即可精准计算样本中抗体浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低可检测 PV-IgG 浓度 1.5ng/mL

检测范围：3.125~100ng/mL

反应时间：样本孵育 60min，酶结合物孵育 30min，底物显色 15min，总时长约 115min

保存条件：试剂盒整体 2~8℃避光密封保存，避免冻融；开封后组分 1 个月内用完

显色系统：TMB 单组分显色液，过氧化氢酶促显色

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

标准曲线绘制：以标准品浓度为 X 轴，对应 OD 值为 Y 轴，采用四参数 Logistic 拟合构建标准曲线，样本浓度由曲线方程换算得出

注意事项：血清样本需避免溶血、脂血；洗板步骤必须充分，防止非特异性结合干扰结果；底物液不可接触强氧化剂
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 30min，拆封酶标板条，设置空白孔、阴性对照孔、阳性对照孔与待测样本孔，每孔加入稀释后样本 100μL，空白孔加样本稀释液。

向所有检测孔内直接加入酶结合工作液 50μL，轻柔震荡酶标板混匀孔内液体，封板膜密封酶标板。

37℃恒温孵育 60min，孵育期间避免酶标板堆叠放置，防止受热不均影响结合反应。

小心撕去封板膜，弃去孔内全部液体，每孔加满洗涤缓冲液，静置 30s 后拍干，重复洗板 5 次，每次洗板后在吸水纸上充分扣干残留液体。

依次向每孔加入显色底物 A 液 50μL、显色底物 B 液 50μL，避光环境下 37℃孵育 15min 进行显色反应。

每孔快速加入终止液 50μL，轻轻晃动酶标板混匀，终止酶促显色反应。

酶标仪设定 450nm 波长，以空白孔调零，测定各孔 OD 吸光度值，对照试剂盒标准曲线计算样本中 PV-IgG 含量。