人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接ELISA核心检测原理，微孔板固相包被纯化的人胃壁细胞内因子抗原，待测样本中的抗内因子抗体可与固相内因子抗原特异性结合，孵育反应后洗去未结合物质；加入辣根过氧化物酶标记的抗人二抗，与结合的IFA抗体精准结合，构建稳定的免疫复合物；经洗板去除游离酶标抗体后，加入底物显色，显色深浅随样本中IFA抗体含量升高而增强，终止显色后检测吸光度，结合标准曲线可定量测定样本中抗内因子抗体浓度。
基本参数‌：

产品名称：人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒

英文名称：IFA  Elisa Kit
货号：Y-E464

规格：48T/96T

灵敏度：0.35AU/mL

检测范围：0.7AU/mL - 22.4AU/mL

反应时间：样本温育 60min，二抗 35min，避光显色 13min

保存条件：2~8℃避光密封保存，微孔板防潮防光照

显色系统：即用型 TMB 显色液

检测波长：450nm

标准曲线绘制：梯度标准品稀释后上机检测，采用非线性拟合绘制标准曲线

注意事项：恶性贫血筛查首选空腹血清样本；洗板不充分易造成背景值偏高
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒所有组分室温回温 30min，取出酶标板，划分实验孔位并标注编号，多余板条密封冷藏。

稀释处理后的待测样本加入对应孔 70μL，阴性、阳性对照孔分别加入对照液 70μL，空白孔不加试剂。

一步法直接加入酶结合工作液 70μL 至所有加样孔，覆膜封口，轻微震荡酶标板混匀液体。

37℃恒温避光孵育 58min，避免光照干扰酶活性。

揭去封板膜，倒掉孔内液体，洗涤液灌满每孔浸泡 35s 弃除，重复洗板 4 次，吸水纸拍干残留液体。

每孔加入显色底物混合液 100μL，37℃避光显色 13min。

加入终止液 50μL 终止反应，摇匀后酶标仪 450nm 检测吸光度，对照标准曲线判定样本抗体数值。
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