人抗磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典间接ELISA原理，以固相包被的纯化磷脂酰丝氨酸抗原为捕获载体，孵育过程中待测样本内的抗磷脂酰丝氨酸抗体可与固相抗原特异性结合，未结合的游离物质经洗板彻底清除；加入辣根过氧化物酶标记的抗人免疫球蛋白二抗，使其与固相上的目标抗体结合，形成稳定的夹心免疫复合物；底物显色后，显色强度与样本中APSA抗体含量呈正相关，终止显色并检测吸光度，对照标准曲线即可精准定量样本中目标抗体含量。
基本参数‌：

产品名称：人抗磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)ELISA试剂盒

英文名称：APSA Elisa Kit
货号：Y-E428

规格：48T/96T

灵敏度：0.4AU/mL

检测范围：0.8AU/mL - 25.6AU/mL

反应时间：样本孵育 70min，酶标二抗 35min，显色 18min

保存条件：2~8℃保存，终止液室温密闭存放即可，其余试剂严禁室温久置

显色系统：可溶性 TMB 显色液，酸性终止后由蓝变黄

检测波长：450nm

标准曲线绘制：设立空白、零标准品、6 个梯度标品，Origin 软件拟合标准曲线

注意事项：洗板机洗板每孔浸泡 30s 再拍干；所有试剂使用前平衡至室温
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温平衡 35min，取出预装包被微孔板，按实验数量拆分板条，标记空白孔、对照孔、待测样本孔。

样本经稀释后向样本孔加样 80μL，阴阳性对照孔加入对应对照试剂 80μL，空白孔不加液体。

直接向全部检测孔加入酶标记结合液 80μL，覆膜密封，水平晃动酶标板使孔内液体充分混匀。

37℃恒温避光孵育 70min，放置过程中酶标板保持水平平放。

掀开封板膜，倾倒孔内废液，洗涤液加满每孔浸泡 40s 后甩干，重复洗板 6 次，彻底去除未结合杂质。

每孔加入显色底物液 100μL，避光室温显色 8min，严格把控显色时长避免过曝。

加入终止液 50μL 终止反应，摇匀后于 450nm 波长读取吸光值，绘制标准曲线计算样本抗体浓度。
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