人活化蛋白C抵抗素(APCR)ELISA试剂盒

本试剂盒基于经典双抗体夹心ELISA检测原理，将APCR特异性捕获抗体固定于微孔板固相载体，加入待测样本与标准品后，样本内APCR抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，随后加入辣根过氧化物酶标记的APCR检测抗体，形成稳定夹心免疫复合物，经洗涤彻底洗除未结合杂质与游离抗体后，加入底物催化显色，显色强度与样本中APCR含量成正比，通过检测吸光度并拟合标准曲线，可定量测定人样本中APCR的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限≤0.08U/mL

检测范围：0.16U/mL~5U/mL

反应时间：一抗室温孵育 90min；二抗避光 45min；显色 20min；终止即刻读数

保存条件：试剂盒整体 2~8℃冷藏，不可冷冻；浓缩洗涤液低温析出结晶可 37℃水浴溶解后使用

显色系统：双组份 A+B TMB 显色体系

检测波长：450nm 单波长检测

标准曲线绘制：标准品梯度稀释 7 个浓度点，线性回归拟合标准曲线，稀释样本结果乘以稀释倍数计算原值

注意事项：血清样本采集后 3000r/min 离心 15min 分离；禁止使用叠氮钠防腐样本，会灭活标记酶
储存与有效期：

未开封整套试剂盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷冻；有效期 12 个月。

开封后保存

剩余酶标板条：自封袋密封，内置干燥剂 2～8℃避光；1 个月内用完。

HRP 酶结合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。

浓缩洗涤液：2～30℃常温保存，结晶温水溶解不影响效果。

复溶后标准品：分装 - 20℃冻存，避免反复冻融，1 个月内使用。

过期试剂禁止使用。

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实验操作流程：

样本前处理：新鲜采集静脉血离心分离血浆样本，不可使用溶血、脂血样本，用试剂盒配套稀释液对血浆进行 1:5 稀释，颠倒混匀后放置冰上暂存。

板孔分组加样：取出 APCR 预包被微孔板，标记空白孔、标准品梯度孔、待测样本孔，样本孔加入稀释后待测液 100μL，标准品孔添加不同浓度 APCR 标准品 100μL，空白孔补稀释液。

一步偶联抗体加注：不进行前置洗板，每孔直接加入酶标记检测抗体工作液 60μL，轻柔水平晃动酶标板 30s，保证孔内液体完全融合。

恒温避光孵育：封板膜严实封盖酶标板，放入 37℃避光孵育环境中反应 55min，保证抗原抗体充分特异性结合。

反复洗板除杂：弃去孔中混合液，每孔注满洗涤液，静置 25s 后用力拍干，连续洗板 4 次，倒置酶标板在吸水纸上彻底吸干残留洗液。

避光底物显色：每孔加入 TMB 显色混合工作液 100μL，37℃避光显色 12min，严格把控显色时长，避免过曝导致数值偏差。

终止读数定量：加入终止液 40μL 终止酶促反应，轻板混匀后立刻使用酶标仪 450nm 测定吸光度，拟合标准曲线换算样本 APCR 含量。