人混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法原理，预先将特异性MLKL抗体包被于固相微孔板表面，封闭非特异性结合位点后，加入待测样本、标准品，样本中的MLKL抗原可与固相抗体特异性结合，再加入酶标记检测抗体形成固相抗体-抗原-酶标抗体夹心免疫复合物，充分洗涤去除未结合游离物质后，加入底物液进行显色反应，在酶的催化下产生有色产物，显色深浅与样本中MLKL含量呈正相关，通过酶标仪检测吸光度值，结合标准曲线即可精准定量样本中MLKL的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出浓度≤0.15ng/mL

检测范围：0.312ng/mL~10ng/mL

反应时间：样本孵育 60min；酶结合物孵育 30min；显色避光 15min；终止后 5min 内读板

保存条件：未拆封试剂盒 2~8℃避光密封保存；开封后板条密封 2~8℃可存 1 个月，其余试剂 2~8℃

显色系统：TMB 单组分显色液，HRP 催化底物显色

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应 OD 值为纵坐标，采用四参数 Logistic 拟合生成标准曲线，样本浓度由曲线换算

注意事项：全程避免板孔交叉污染；显色液严禁接触皮肤黏膜；样本需无溶血无脂血，冻融样本不可反复超过 2 次
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

样本稀释处理：取待测血清 / 血浆 / 组织匀浆样本，按照试剂盒说明书推荐稀释比例用样本稀释液梯度稀释，充分涡旋混匀，室温静置 5min 备用，全程避免样本反复冻融。

酶标板加样包被：取出预包被 MLKL 抗体 96 孔酶标板，设置空白孔、标准品孔、待测样本孔，每孔先加入对应稀释后样本 100μL，标准品孔依次加入梯度浓度标准品 100μL，空白孔加入等体积样本稀释液。

一步法酶结合物添加：无需洗板，直接向所有加样孔中加入 HRP 标记二抗工作液 50μL，轻晃酶标板使液体充分混合，封板膜密封酶标板。

温育孵育反应：将封板后的酶标板置于 37℃恒温孵育箱避光孵育 60min，孵育期间严禁随意挪动酶标板，防止孔间交叉污染。

洗板洗涤步骤：揭去封板膜，倒掉孔内液体，每孔加满洗涤缓冲液，浸泡 30s 后拍干，重复洗板 5 次，最后一次拍板至孔内无残留液滴。

底物显色反应：每孔依次加入显色底物 A 液、B 液各 50μL，避光条件下 37℃孵育 15min，观察标准品孔出现明显蓝色梯度即为显色正常。

终止与上机检测：每孔快速加入终止液 50μL 终止显色反应，酶标仪设置 450nm 主波长、630nm 参比波长，10min 内读取各孔 OD 值，根据标准曲线计算样本 MLKL 浓度。