人核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)ELISA试剂盒

本试剂盒基于酶联免疫吸附间接法检测人核仁形成区嗜银蛋白（Ag-NORs）含量，微孔板包被Ag-NORs特异性抗原，待测样本中的Ag-NORs抗体可与固相抗原特异性结合，洗涤后加入酶标记抗人IgG二抗，结合已吸附的样本抗体，经底物显色、终止反应后测定吸光度，吸光度值与样本中Ag-NORs抗体含量呈正相关，结合标准曲线可定量检测目标指标水平。
产品参数：

‌灵敏度：检测极限 0.08OD 值单位

检测范围：0.1～8.5OD U

反应时间：抗原吸附 68min，后续显色步骤 77min，全程 148min

显色系统：银染耦合 HRP-TMB 显色双系统

检测波长：450nm 与 600nm 双波长

特异性：靶向核仁 rDNA 结合蛋白，胞浆蛋白无交叉反应

重复性：板内 CV＜7.8%，板间 CV＜10.8%

注意事项：细胞涂片样本需固定充分，未固定样本无法显色
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒全部试剂室温放置 33min 恢复温度，配制工作洗涤液，取用微孔板条。

梯度稀释 Ag-NORs 标准品，细胞提取液样本离心取上清并稀释。

分孔加入标准品、待测样本、空白对照液，同步加入酶标工作液，覆膜密封板条。

37℃避光孵育 70min。

揭膜弃净液体，洗涤液浸泡每孔 45s，拍干，重复洗板 5 次。

加入显色底物避光显色 19min。

终止液终止反应，450nm 波长检测吸光值，标准曲线定量 Ag-NORs。