人抗肝肾微粒体抗体(LKM)ELISA试剂盒

本试剂盒基于间接ELISA检测原理，以固相包被的人肝肾微粒体特异性抗原为捕获载体，待测样本中的人抗肝肾微粒体抗体可与固相抗原特异性结合，形成固相抗原-样本抗体免疫复合物；经洗涤洗去未结合成分后，加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgG二抗进行特异性结合，孵育洗涤后加入底物发生酶促显色反应，终止反应后通过酶标仪检测吸光度值，样本中LKM抗体含量越高，显色越深，以此实现对样本中该抗体的精准定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人抗肝肾微粒体抗体(LKM)ELISA试剂盒

英文名称：LKM  Elisa Kit
货号：Y-E474

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.8AU/mL

检测范围：1.25AU/mL～20AU/mL

反应时间：一抗结合孵育 90min；酶结合物孵育 45min；底物显色 12min

保存条件：试剂盒整体 2～8℃冷藏，严禁冷冻；剩余微孔板干燥剂密封 2～8℃放置

显色系统：双组份 A+B TMB 显色体系

检测波长：单波长 450nm 直接测定

标准曲线绘制：标准品梯度稀释，线性回归拟合标准曲线，OD 值代入公式计算样本抗体含量

注意事项：不可反复冻融待测血清；洗板步骤务必充分，减少非特异性吸附；终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

样本预处理：分离无溶血人血清，以样本稀释液 1:80 稀释，颠倒混匀 8 次，室温放置 8min，浑浊样本 3000r/min 离心 10min 取上清使用。

孔位规划加样：酶标板拆取所需条板，标注孔类型，空白孔加稀释液 100μL，阴阳性对照孔各加对照品 100μL，样本孔加入稀释上清 100μL。

一步共混加酶标抗体：所有反应孔直接加入辣根过氧化物酶标记抗原工作液 100μL，封板后水平摇晃板面 15s 混合液体。

温育结合：37℃水浴环境避光孵育 45min，水浴液面没过板孔 1/2 高度，保证受热均匀。

洗板操作：弃去孔中液体，每孔注满洗涤液，静置 20s 后倒扣拍干，连续洗板 4 次，每次拍干力度一致。

显色操作：每孔加入 TMB 显色底物混合液 100μL，避光室温显色 12min，观察孔内蓝色深浅变化。

终止与测定：加入 2M 硫酸终止液 50μL 终止反应，轻板混匀，酶标仪 450nm 单波长检测吸光度，根据临界值判定阴阳性结果。
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