人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA技术检测样本中人骨髓抑制因子1含量。试剂盒固相载体包被MPIF-1/CCL23特异性捕获抗体，加入待测样本后，样本中的目标细胞因子与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质，加入酶标记配对检测抗体形成免疫复合物，经底物催化显色后，显色强度与样本中MPIF-1/CCL23浓度呈正相关，可精准检测该骨髓调控因子的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出 0.04pg/mL

检测范围：0.09~5.76pg/mL

反应时间：捕获孵育 98min，酶标二抗 62min，显色 15min

显色系统：即用型 TMB 显色液

检测波长：450nm，参比 630nm

特异性：对其他 CC 类趋化因子交叉反应＜4%

重复性：板内 CV＜6.5%，板间 CV＜8.5%

注意事项：外周血单核细胞上清样本 4℃短期保存，不可室温久放
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂室温平衡 37min，梯度稀释 MPIF-1 重组标准蛋白，排布待测体液样本孔、标准孔、空白孔。

每孔加入 50μL 预处理待测样本，标准孔添加梯度标准液，空白孔补稀释液。

一步法加入酶偶联抗 CCL23 抗体 100μL，封板密封，37℃孵育 74min 完成免疫捕获。

洗板 4 轮，每轮洗涤浸泡 46s，倒扣板条彻底去除废液。

加入显色底物混合液 100μL，37℃避光显色 17min。

加入终止液 50μL 终止催化显色，轻震微孔板混匀液体。

450nm 测定吸光度，对照标准曲线计算因子浓度。