人抗肺泡基底膜抗体(ABM-Ab)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接ELISA检测原理，固相酶标板包被纯化的肺泡基底膜抗原，加入待测样本后，样本中的抗肺泡基底膜抗体与固相抗原特异性免疫结合，洗板清除未结合物质，加入酶标记抗人二抗特异性结合，经显色、终止反应后检测吸光度，依托标准曲线定量检测样本中ABM-Ab的浓度水平。
基本参数‌：

产品名称：人抗肺泡基底膜抗体(ABM-Ab)ELISA试剂盒

英文名称：ABM-Ab Elisa Kit
货号：Y-E438

规格：48T/96T

灵敏度：0.1IU/mL

检测范围：0.2–19IU/mL

反应时间：样本孵育 90min，二抗 60min，显色 16min，总 166min

保存条件：整套试剂 2～8℃，洗涤液可室温长期存放

显色系统：双组份 TMB 混合显色

检测波长：450nm，参比 620nm

标准曲线绘制：五梯度标准品线性回归生成标准曲线计算浓度

注意事项：肺出血肾炎综合征特异性指标；样本不可高温灭活处理
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

样本处理

血清样本 3000rpm 离心 15min 取上清，肺泡灌洗液样本过滤后离心取上清检测。

试剂室温适配

整套试剂室温静置 31min，浓缩洗涤液按照比例蒸馏水稀释搅拌均匀。

标准品系列配制

ABM 抗体标准品复溶倍比稀释 7 梯度，每标准微孔加样 50μL，设置阴性对照孔。

样本共孵育反应

待测样本 50μL，加入生物素化肺泡基底膜抗原 50μL，封板 37℃孵育 65min。

洗板去除游离结合物

倾倒废液，洗涤液浸泡 40s 拍干，连续洗板 6 次，彻底吸干微孔内液体。

酶促显色孵育

加入 HRP 亲和素孵育 26min，洗板后添加显色液避光显色 15min。

终止上机定量

终止液终止酶反应，450nm 测 OD 值，依据标准曲线计算抗体浓度。
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