人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接法ELISA检测原理定性、定量检测样本中人庚型肝炎病毒IgM抗体。试剂盒固相板包被纯化的HGV特异性抗原，加入待测样本后，样本中的HGV-IgM抗体可与固相抗原特异性结合，洗去未结合的非特异性杂质，再加入酶标记的抗人IgM二抗，与结合在固相上的IgM抗体发生特异性结合，加入底物显色后，显色强度与样本中HGV-IgM抗体含量呈正相关，据此可判断样本是否存在HGV感染及抗体表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：阳性参考品最低稀释度 1:100 可检出

检测范围：血清稀释比例 1:50~1:3200

反应时间：样本孵育 90min，酶结合物 60min，显色 15min

显色系统：TMB 底物显色，硫酸终止

检测波长：450nm/630nm 双波长

特异性：与甲肝、乙肝、丙肝 IgM 抗体无交叉反应

重复性：同板重复孔 CV＜7%，批次间 CV＜9%

注意事项：生物样本按感染性废弃物处理；弱阳性样本建议复检确认
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 25min，设置阳性对照孔、阴性对照孔、标准孔、待测血清样本孔。

每孔加入 50μL 待测血清样本，对照孔加入对应阴阳对照液，空白孔加稀释液。

一步加入酶标记 HGV 抗原工作液 100μL，封板，37℃孵育 60min 捕获特异性 IgM 抗体。

弃液洗板 6 次，每次浸泡 30s，拍干微孔无残留洗涤液。

每孔添加显色 A、B 液各 50μL，避光室温显色 17min。

加入终止液 50μL 终止酶促反应，混匀微孔内液体。

450nm 读取 OD 值，根据临界值判定样本 HGV-IgM 阴阳性并定量。