人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测样本中人高分子量细胞角蛋白含量。试剂盒预先将特异性抗人CK-HMW抗体包被于固相微孔板，加入待测样本后，样本中的CK-HMW抗原可与固相抗体发生特异性结合，洗去未结合杂质后，加入酶标记检测抗体形成固相抗体-抗原-酶标抗体夹心免疫复合物，再次洗涤去除游离组分，加入酶底物进行显色反应，底物显色深浅与样本中CK-HMW含量呈正相关，通过酶标仪测定吸光度，结合标准曲线即可精准定量样本中CK-HMW浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出量≤0.1ng/mL

检测范围：0.312~20ng/mL

反应时间：样本孵育 60min，酶结合物孵育 30min，底物显色 15min，总时长约 105min

显色系统：TMB 单组份显色液，硫酸终止液终止反应

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

特异性：仅识别人 CK-HMW，与低分子量角蛋白、其他细胞骨架蛋白无交叉反应

重复性：板内 CV＜6%，板间 CV＜8%

注意事项：试剂盒需 2~8℃避光保存，开封后尽快用完；避免样本反复冻融；底物液避光操作，不可接触氧化剂
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

取出试剂盒所有组分室温平衡 30min，配制 CK-HMW 系列标准品梯度稀释液，标记 1-6 号标准孔。

包被板每孔加入 50μL 对应标准品、待测血清样本，空白孔加等量样本稀释液，无需孵育直接进入一步结合。

每孔即刻加入 100μL 酶标记抗 CK-HMW 结合抗体，封板膜密封微孔板，37℃恒温避光孵育 60min。

弃去孔内全部液体，使用试剂盒浓缩洗涤液稀释后洗板 5 次，每次浸泡 30s，拍干孔内残留液体。

每孔依次加入显色液 A 液、B 液各 50μL，轻柔震荡混匀，37℃避光显色 15min。

快速加入 50μL 终止液终止酶促显色反应，轻晃微孔板保证孔内液体混匀。

酶标仪设置 450nm 主波长，立即测定各孔 OD 吸光度值，根据标准品曲线计算样本 CK-HMW 浓度。