人抗DNA酶B抗体(anti-DNase B)ELISA试剂盒

本试剂盒依托间接ELISA检测原理，将高纯度DNA酶B抗原包被于酶标板微孔，加入待测样本后，样本中的抗DNA酶B抗体可与固相抗原特异性免疫结合，洗板清除游离杂质，再加入酶标记抗人IgG二抗进行结合反应，经底物显色、终止反应后，检测各孔吸光度值，对照标准曲线精准定量样本中人抗DNA酶B抗体的水平。
基本参数‌：

产品名称：人抗DNA酶B抗体(anti-DNase B)ELISA试剂盒

英文名称：anti-DNase B  Elisa Kit
货号：Y-E456

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 10U/mL

检测范围：20–640U/mL

反应时间：样本孵育 70min，酶标二抗 45min，显色 15min，总 130min

保存条件：试剂盒 2–8℃，浓缩洗涤液可室温放置 3 个月

显色系统：TMB 双液显色

检测波长：450nm

标准曲线绘制：梯度标准品线性回归建立曲线，换算样本抗体效价

注意事项：链球菌感染急性期样本检测最佳；溶血血清会升高本底值，不可使用
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

样本离心提纯

血清样本 3000rpm 离心 15min，去除血细胞沉淀，脂血样本静置分层后吸取下层澄清血清。

试剂盒试剂预处理

全部试剂室温放置 33min，浓缩洗涤液按说明比例稀释，充分混匀备用。

标准品系列梯度

DNase B 抗体标准品溶解后做 7 点梯度稀释，每孔加入 50μL 对应浓度标准品，预留空白孔。

一步加样温育

待测样本 50μL 加入微孔，加入生物素标记 DNase B 抗原 50μL，封板后 37℃孵育 75min。

多次洗板操作

弃液后洗涤液加满微孔浸泡 40s，拍干，连续洗板 5 次，每次彻底吸干残留液体。

链霉亲和素结合显色

加入 HRP 亲和素 100μL 孵育 30min，洗板后加 TMB 显色液避光显色 15min。

终止上机读数

终止液终止反应，450nm 测定吸光度，绘制标准曲线计算抗体含量。
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