人军团菌抗体IgA(LP Ab-IgA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验原理，将纯化的军团菌抗原包被在酶标板微孔中，封闭非特异性结合位点后，加入待测样本，样本中存在的人军团菌IgA抗体会与微孔内的军团菌抗原发生特异性免疫结合，洗涤除去未结合的杂质，再加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgA二抗，使其与样本结合的IgA抗体结合，经底物显色、终止反应后，通过检测吸光度值，依据标准曲线定量检测样本中军团菌抗体IgA的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人军团菌抗体IgA(LP Ab-IgA)ELISA试剂盒

英文名称：LP Ab-IgA  Elisa Kit
货号：Y-E596

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出滴度 1:20

检测范围：阳性判定临界值 OD 0.18–2.8

反应时间：样本室温孵育 90min，洗板，酶结合物孵育 60min，显色 20min，终止读数，全程约 180min

保存条件：试剂盒整体 2～8℃保存，浓缩洗涤液室温避光存放即可，不可冷冻

显色系统：双组份 TMB 显色体系

检测波长：450nm 单波长检测

标准曲线绘制：设置阴阳性对照 + 梯度稀释阳性标准品，OD 值拟合线性曲线，大于临界值判定为 IgA 抗体阳性

注意事项：样本需新鲜分离血清，反复冻融样本易出现假阴性；每板必须设置阴阳对照孔；终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

样本预处理

采集静脉血分离血清，无溶血、无脂血、无黄疸样本可直接检测；浑浊血清经 8000r/min 离心 8min 取上层清液，短期 4℃存放不超 24h，长期保存分装 - 20℃冷冻。

试剂室温平衡

整套试剂盒所有组分室温放置 25min；浓缩洗涤液按说明书配比用纯水稀释混匀，配好的洗涤液室温存放，24h 内用完。

标准品配制加孔

军团菌 IgA 标准品用稀释液完全溶解，梯度稀释 7 个浓度梯度，标准品孔每孔添加稀释后标准品 50μL；阴性对照孔加阴性对照血清 50μL，空白孔空置备用。

一抗结合孵育

待测血清样本每孔加入 50μL，再加入辣根过氧化物酶标记抗人 IgA 抗体工作液 50μL，封板膜封板，37℃温箱孵育 45min。

多次洗板

弃去孔内反应液，每孔注满洗涤液，浸泡 40s 后倒扣拍干，连续洗板 4 次，每次彻底拍干微孔内液体，防止非特异性结合干扰结果。

避光显色

每孔加入底物显色混合液 100μL，轻轻晃动酶标板混匀，37℃避光条件下显色 12min，严格把控显色时长避免过曝。

终止检测

每孔加入终止液 50μL 终止反应，酶标仪 450nm 单波长读取 OD 值，对照标准曲线判定样本军团菌 IgA 抗体阳性 / 阴性及抗体浓度。
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