人迟现抗原4(VLA4)ELISA试剂盒

本试剂盒基于抗原抗体特异性结合与酶促显色放大原理，采用双抗体夹心法检测人VLA4含量，微孔板固相包被迟现抗原4特异性捕获抗体，待测样本中的VLA4抗原与固相抗体特异性结合，洗涤后加入酶标检测抗体形成稳定免疫复合物，充分反应后洗涤去除游离试剂，加入底物显色，显色深浅与样本中VLA4浓度成正比，结合标准曲线实现精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：0.06ng/mL

检测范围：0.18ng/mL–11.52ng/mL

反应时间：110min，样本 60min，二抗 35min，显色 15min

显色系统：HRP-TMB 底物显色

检测波长：450nm+630nm

特异性：特异性识别 α4β1 整合素 VLA4，与其他整合素家族分子交叉＜4%

重复性：板内 CV＜6.6%，板间 CV＜8.4%

注意事项：淋巴细胞悬液样本需离心取上清；试剂盒 2~8℃避光存放。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

整套试剂盒室温放置 30min，梯度稀释 VLA4 标准蛋白，酶标板做好孔位标记分类。

向微孔加入梯度标准液、细胞悬液上清待测样本、空白稀释液。

直接加入酶偶联检测抗体覆膜密封，37℃孵育 70min 一步夹心 ELISA。

弃液后洗板 6 次，浸泡 30s / 次，去除非特异性吸附杂质。

显色液避光室温显色 18min。

终止液终止显色反应并混匀液体。

450nm 测定吸光度，计算样本 VLA4 表达量，归档实验数据。