人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，固相微孔板固定人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)特异性抗体，样本中的MCT抗原与固相抗体特异性识别结合，后续结合酶标检测抗体形成稳定免疫复合物，通过酶催化底物显色，检测吸光度值即可定量测定样本中人MCT的表达水平。
基本参数‌：

产品名称：人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)ELISA试剂盒

英文名称：MCT Elisa Kit
货号：Y-E3065

规格：48T/96T

灵敏度：检出限 0.05ng/mL

检测范围：0.12ng/mL - 14ng/mL

反应时间：样本孵育 82min，酶二抗 46min，显色 17min

显色系统：稳定 TMB 显色液

检测波长：450nm

特异性：仅识别 β 类胰蛋白酶，α 亚型交叉反应＜2.2%

重复性：板内 CV≤5.7%，板间 CV≤7.9%

注意事项：采血避免剧烈震荡诱发肥大细胞脱颗粒，造成本底异常升高
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒全部试剂室温平衡 30min，稀释洗涤工作液，配制 MCT 系列梯度标准品，划分酶标板检测区域。

空白孔加稀释液 50μL，标准与样本孔加入对应液体 50μL，随即加入一步法酶结合液 100μL，封板封口。

37℃避光孵育 46min，全程避光保存反应板。

弃液后洗涤液灌满孔内浸泡 42s，拍干，洗板 6 次。

加入显色底物 A、B 液各 50μL，混匀后室温避光显色 15min。

滴加终止液 50μL 终止酶促反应。

酶标仪 450nm 读值，换算样本中 MCT 类胰蛋白酶浓度。
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