人反三碘甲状腺原氨酸(rT3)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争ELISA检测原理，针对小分子反三碘甲状腺原氨酸(rT3)的检测特性设计，固相微孔板包被rT3抗原，待测样本中的人rT3与固相抗原竞争结合有限的酶标记rT3特异性抗体，样本中rT3含量越高，结合在固相上的酶标抗体越少，后续酶促底物显色越浅，通过吸光度值可反向定量测定样本中人rT3的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人反三碘甲状腺原氨酸(rT3)ELISA试剂盒

英文名称：rT3  Elisa Kit
货号：Y-E642

规格：48T/96T

灵敏度：最小检测浓度 0.015nmol/L

检测范围：0.05nmol/L - 5nmol/L

反应时间：竞争结合孵育 95min，酶标抗原孵育 40min，显色 16min

显色系统：OPD 底物显色体系

检测波长：490nm，参比 650nm

特异性：几乎不与 T3、T4 发生交叉反应，交叉率＜1.8%

重复性：板内 CV≤6.0%，板间 CV≤8.0%

注意事项：采血后血清分离需在 2h 内完成；甲亢、甲减干扰样本需做好组别对照
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒全部试剂常温放置 30min，稀释浓缩洗涤液，梯度稀释 rT3 标准品，在酶标板上做好组别标记。

空白孔加稀释液 50μL，标准品与样本孔加入对应样本 50μL，随即加入一步法酶结合液 100μL，封板封口。

37℃避光孵育 40min，酶标板水平放置避免液体倾斜流失。

倒掉废液，每孔加满洗涤液浸泡 25s，拍干，洗板 5 次。

加入 TMB 显色液 100μL / 孔，室温避光显色 13min。

加入终止液 50μL 终止反应，轻微震荡混匀。

酶标仪 450nm 读取 OD 值，对照标准曲线计算血清样本 rT3 浓度。
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