人不耐热肠毒素B亚单位(LTB)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固相包被人LTB特异性捕获抗体，加入待测样本后，样本中的不耐热肠毒素B亚单位可与固相抗体特异性结合，孵育完成抗原抗体反应后洗涤去除游离杂质，加入酶标检测抗体形成稳定的夹心免疫复合物，再次洗涤后加入显色底物，经酶催化产生特异性显色反应，显色深浅与样本中LTB含量成正比，通过吸光度检测与标准曲线比对，精准定量样本靶标含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出 0.04ng/mL

检测范围：0.12ng/mL–7.68ng/mL

反应时间：夹心法 100min，样本 65min，二抗 20min，显色 15min

显色系统：单组份稳定型 TMB 显色液

检测波长：450nm

特异性：特异性结合 LTB，与 LTA 无交叉反应

重复性：板内 CV＜6.2%，板间 CV＜8.3%

注意事项：粪便样本需稀释预处理去除颗粒物；阳性对照需单独分装，防止交叉污染。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温放置 32min，梯度稀释 LTB 标准品，对酶标板进行分组标记，区分阳性对照、待测、空白孔。

移液枪精准加样，标准孔加 LTB 梯度标准品，样本孔加预处理待测标本，空白孔加稀释液。

直接加入酶标抗体工作液封板，37℃湿盒避光孵育 58min，一步法完成夹心结合。

掀开封板倒掉废液，洗板液洗涤微孔 4 次，每次浸泡 45s，拍干板内残留液体。

加入显色底物混合液，避光室温显色 13min，严控显色时长防止本底偏高。

加入终止液终止显色反应，水平震荡酶标板混匀。

酶标仪 450nm 测 OD 值，拟合标准曲线计算样本 LTB 浓度，归档实验记录。