人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接ELISA法检测人样本中艾柯病毒IgM(ECHO IgM)抗体。微孔板固相包被纯化的艾柯病毒特异性抗原，加入待测样本后，样本中的ECHO IgM抗体与固相抗原特异性结合，洗去未结合的无关成分。随后加入HRP标记的抗人IgM二抗，特异性结合已固定的靶抗体，再次洗涤后加入TMB底物显色，酶促反应生成稳定有色产物。终止反应后检测吸光度，吸光度与样本中ECHO IgM抗体含量呈正相关，可实现对艾柯病毒感染早期抗体的定性与定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低阳性稀释度 1:32

检测范围：抗体滴度 1:32~1:2048

反应时间：样本温育 55min，抗人 IgM 酶二抗 40min，显色 12min

显色系统：TMB 显色液

检测波长：450nm

特异性：与柯萨奇病毒 IgM 无交叉假阳性

重复性：板内 CV＜7%，板间 CV＜9%

注意事项：类风湿因子阳性血清易出现非特异结果，建议预处理样本
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 35min，取出预包被酶标板，按需截取板条，划分标准孔、血清样本孔、空白孔。

标准孔加入梯度稀释 ECHO IgM 阳性对照标准品 50μL；样本孔加入稀释待测血清 50μL；空白孔不加试剂。

所有非空白孔加入一步法酶标记抗人 IgM 结合液 50μL，震荡混匀，封板膜严密封口。

37℃恒温避光孵育 80min，避免强光直射试剂盒。

倾倒废液，洗板液灌满微孔浸泡 45s，拍干残留液体，连续洗板 6 次。

每孔加入显色底物 A、B 各 50μL，遮光混匀，37℃避光显色 22min。

加入终止液 50μL 终止显色，充分混匀，450nm 波长检测吸光度，判读样本艾柯病毒 IgM 抗体水平。