人阿米巴(Amebiasis)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接ELISA法检测人样本中阿米巴(Amebiasis)特异性抗体。微孔板固相包被纯化的阿米巴抗原，加入待测人样本后，样本中针对阿米巴的特异性抗体与固相抗原发生特异性结合，洗去未结合的无关抗体及杂质。随后加入HRP标记的抗人IgG二抗，特异性结合样本中已吸附的抗体，再次洗涤后加入TMB底物显色，酶促反应产生有色产物，终止反应后检测吸光度。样本中阿米巴抗体含量越高，显色越深，吸光度值越高，结合标准曲线可定性、定量判断阿米巴感染相关抗体水平。
产品参数：

‌灵敏度：阳性检出下限滴度 1:40

检测范围：血清抗体滴度 1:40~1:2560

反应时间：样本温育 65min，酶标二抗 35min，显色 15min

显色系统：OPD 显色体系

检测波长：490nm

特异性：无弓形虫、疟原虫抗体交叉阳性

重复性：板内 CV＜7.5%，板间 CV＜9.5%

注意事项：用于血清抗体筛查，急性期与恢复期双份血清比对结果更准确
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

整套试剂盒室温平衡 35min，取出预包被酶标板，拆分所需板条，标记标准孔、样本孔、空白孔。

标准孔加入梯度稀释阿米巴抗原标准品 50μL；样本孔加入患者血清稀释样本 50μL；空白孔不加试剂。

非空白孔加入一步法酶标记检测抗体工作液 50μL，轻柔摇晃酶板混匀，密封封板膜。

37℃恒温避光孵育 75min，避免环境温差干扰结合反应。

倾倒废液，洗板液加满微孔浸泡 40s，吸水纸拍干，重复洗板 6 次。

每孔依次添加显色液 A、B 各 50μL，避光混匀，37℃避光显色 20min。

加入终止液 50μL 终止反应，充分混匀，酶标仪 450nm 读数，依据标准曲线判定样本阿米巴相关指标浓度。